运用变性高效液相色谱快速检测TEM型产超广谱β-内酰胺酶菌株

• 作者: 刘彩林 孙明月 孙自镛 廖亚龙 徐令清 朱旭慧 欧国平 汪峰 汪玥
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 变性高效液相色谱 超广谱β-内酰胺酶 TEM型 基因分型
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 基础实验研究论著
• 页码范围: 1283-1285
• 分类号: R446.5
• 字数: 2806字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2012.11.002

摘要

目的 建立一种快速检测TEM型产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)临床分离菌及其流行病学监测的新方法.方法 采用PCR技术从临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物用变性高效液相色谱(DHPLC)技术进行分析并进行DNA测序,确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型.结果 共检测66株临床分离菌,其中42株扩增出TEM型基因.经过DHPLC分析,35株表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;5株表现为一种异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,测序结果表明它们均存在两种相同的基因突变,经比对后确定为TEM-10型;另外2株表现为另一种异常的洗脱峰,测序结果显示为TEM-116型.结论 DHPLC技术可用于细菌耐药基因的分型检测,不但灵敏度和特异度高,而且具有经济、快捷、高通量等特点,具有很大的潜在临床应用价值.