猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及应用

• 作者: 孙思扬 杨春华 沈艳 王川庆 祝建新 钟毅 陈庆富
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 变性高效液相色谱 实时荧光PCR
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 167-171
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性和重复性;对阳性标准品的检测结果表明,所建立的PCR-DHPLC法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。对16份疑似病料分别应用本试验所建立的PCR-DHPLC法与SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法、病毒培养法进行检测,发现有15份荧光定量PCR阳性,15份PCR-DHPLC阳性,12份PCR-凝胶电泳阳性。结果表明,建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。