慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立

• 作者: 刘勤 刘昌峨 周晓杨 王勇 王露露 魏泓
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: HLA-G 慢病毒 转基因小鼠
• 年，卷（期）: 2012,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1392-1396
• 分类号: R-332|R373|R394-33
• 语种: 中文

摘要

[目的]以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物.[方法]利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G.用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞,包装成慢病毒.通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照,测定FUW-HLA-G病毒液的滴度.用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立HLA-G转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测HLA-G蛋白的表达.[结果]载体BamH I、EcoR I双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致.浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求.PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达.[结论]通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠,为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏泓	第三军医大学基础医学部实验动物学教研室	242	2753	27.0	38.0
2	王勇	第三军医大学基础医学部实验动物学教研室	88	762	14.0	24.0
3	刘勤	第三军医大学基础医学部实验动物学教研室	9	35	3.0	5.0
4	周晓杨	第三军医大学基础医学部实验动物学教研室	3	5	1.0	2.0
5	王露露	第三军医大学基础医学部实验动物学教研室	5	27	2.0	5.0
6	刘昌峨	第三军医大学基础医学部实验动物学教研室	6	28	2.0	5.0