慢病毒介导的绿色荧光蛋白转基因小鼠的制备及鉴定

• 作者: 刘光泽 周军辉 孔祥平 尤玉琴 李秀梅 陈媚娟 陈文吟 黎经纬
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒属 绿色荧光蛋白质类 小鼠,转基因 转染
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: HBV转基因小鼠研究专栏
• 页码范围: 964-966
• 分类号: R349.83
• 语种: 中文

摘要

目的 以携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒为载体制备转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台.方法 将慢病毒表达载体FUGW与ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix按1∶2比例混合,用LipofectamineTM 2000转染293FT细胞,包装出的病毒经浓缩后以293T细胞测定病毒滴度.采用受精卵卵周隙显微注射的方式制备转基因小鼠.出生小鼠用PCR法检测GFP基因整合情况,并在荧光体视显微镜下鉴定外源基因的表达情况.结果 病毒包装过程中,转染后24h即可见GFP表达,72h时293FT细胞的转染效率达95%以上,镜下可见大量绿色荧光.包装出的慢病毒滴度为106 U/ml,经浓缩后可达108U/ml.PCR检测显示,F0代小鼠GFP FCR阳性率为70.27%(26/37).荧光体视显微镜下观察荧光小鼠所占比例,F0代为65.2%(15/23),F1代为55.0%(11/20),荧光强度在两代个体中相当.F0代、F1代中GFP均呈广泛表达.结论制备出携带GFP可传代的转基因小鼠,建立了慢病毒载体介导的转基因小鼠制备技术平台.