慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠

• 作者: 刘科 姚开泰 姚志芳 孙妍 张晟 杜文婷 林晓琳 申红芬 肖东 肖高芳 贾俊双 饶子亮
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 红色荧光蛋白 慢病毒载体法 转基因小鼠
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 12-16,后插1
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q812
• 字数: 4082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2010.02.003

摘要

目的 利用慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠,并建立转基因小鼠的技术平台.方法 将携带mRFP基因的慢病毒注入ICR鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP转基因鼠.结果 移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2只假孕母鼠,共获得仔鼠6只;利用体视荧光显微镜检测mRFP表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2只 (R3和 R4) 鼠耳高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR鼠无明显差别,而DNA水平检测证实,6只F0代中,5只(R1、R2、R3、R4和 R5)基因组中整合有外源转基因hUb-mRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果.此外,mRFP转基因首建鼠基因组中整合的mRFP基因可稳定遗传和表达.结论 建立了慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉 (RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础.