携带增强绿色荧光蛋白基因的Id2真核表达载体构建

• 作者: 余磊 张黎声 杨俊 欧阳钧 秦建强 邱小忠 陆云涛
• 来源期刊: 中国临床解剖学杂志
• 关键词: 分化抑制因子2 构建 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 276-277
• 页数: 2页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-165X.2005.03.014

摘要

目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,为骨骼肌的组织工程研究提供有效的分子工具.方法:利用RT-PCR的方法扩增出Id2全长cDNA,利用T4 DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2 cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoRI酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;并通过细胞转染技术将Id2基因导入L6成肌细胞中.结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2cDNA片段,获取了转染外源性Id2基因的L6细胞.结论:我们成功构建了同时携带有G418筛选位点和增强绿色荧光蛋白的Id2真核表达载体.