携带增强绿色荧光蛋白基因的人14-3-3σ真核表达载体的构建及其在转染乳腺癌MCF-7细胞的表达

• 作者: 郝苗 马玲 齐凤杰
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 基因 绿色荧光蛋白质类
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1342-1345
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2013.04.083

摘要

目的 构建携带增强绿色荧光蛋白基因的人14-3-3σ真核表达载体pEGFP-GV142-SFN并转染至人乳腺癌MCF-7细胞,鉴定所表达的蛋白活性.方法 通过逆转录-聚合酶链反应从胎脑组织中获得编码14-3-3σ的全长cDNA,定向克隆至真核表达载体GV142中,鉴定正确后与带有增强绿色荧光蛋白的pEGFP-N1-SFN酶切后连接,重组携带14-3-3σ的表达载体pEGFP-GV142-SFN.将pEGFP-GV142-SFN质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞,观察荧光蛋白的表达.结果 经限制性内切酶酶切分析、聚合酶链反应和DNA序列测定证实目的 基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察发现:转染24 h后,乳腺癌MCF-7细胞内可见增强绿色荧光蛋白表达,48 h表达最稳定,72 h可见荧光蛋白淬灭,细胞形态逐渐消失.结论 成功构建了14-3-3σ真核表达载体pEGFP-GV142-SFN并转染至乳腺癌MCF-7细胞,观察和检测到绿色荧光蛋白表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	齐凤杰	辽宁医学院附属第一医院病理科	65	239	8.0	11.0
2	马玲		2	8	1.0	2.0
3	郝苗		2	8	1.0	2.0