真核表达质粒PIRESneo3/miR-194的构建及其在乳腺癌细胞MCF-7中的表达

• 作者: 李佳 王本忠
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: miRNA 转染 乳腺癌 质粒
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 772-776
• 分类号: R394|R737.9
• 字数: 3699字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2012.07.005

摘要

目的 构建含miR-194基因的真核表达质粒,建立miR-194稳定表达的MCF-7乳腺癌细胞株.方法 设计合成miR-194引物序列,PCR法从乳腺癌231细胞中扩增出目的片段,经双酶切后定向连入PIRESneo3载体,构建PIRESneo3/miR-194真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的正确性.脂质体法将重组质粒转入MCF-7细胞,G418药物筛选出稳定转染的细胞,实时荧光定量PCR法检测稳定转染MCF-7细胞中miR-194基因的表达水平.结果 构建的PIRESneo3/miR-194质粒经酶切、测序等检验表明质粒构建成功,筛选获得稳定高表达miR-194的MCF-7乳腺癌细胞株.结论 成功构建了PIRESneo3/miR-194真核表达质粒以及稳定高表达miR-194的MCF-7细胞株.为进一步观察该基因对乳腺癌细胞的体外效应和以miR-194为靶点的乳腺癌基因治疗研究提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王本忠	安徽医科大学第一附属医院乳腺外科	77	389	11.0	15.0
2	李佳	安徽医科大学第一附属医院乳腺外科	24	68	3.0	7.0