pcDNA3.1(+)/caveolin-1真核表达质粒的构建及其在MCF-7乳腺癌细胞株中的表达

• 作者: 代志军 刁岩 包兴 康华峰 王西京 闵卫利 马小斌
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: caveolin-1 真核表达质粒 真核细胞转染 乳腺癌细胞株
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 16-19
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文

摘要

目的 明确正常组织和人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1的表达情况,构建pcDNA3.1( +)/caveolin-1表达质粒,并鉴定其表达.方法 RT PCR法检测9种正常人体组织及人乳腺癌细胞株MCF-7中caveolin-1基因的扩增情况；Western blotting法检测MCF-7细胞中caveolin-1蛋白的表达情况.设计克隆引物和表达引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,用EcoRⅠ+XbaⅠ内切酶消化回收PCR产物和质粒pcDNA3.1(+),连接后构建pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒.挑选pcDNA3.1(+)/caveolin-1转染感受态细菌后的单菌落进行PCR鉴定,阳性菌落培养后提取质粒行酶切鉴定及测序鉴定.瞬时转染MCF-7细胞后Western blotting检测caveolin-1蛋白的表达情况.结果 ①9种正常组织中均有caveolin-1基因扩增,MCF-7细胞中无caveolin-1基因扩增且无蛋白表达；②pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒转染MCF-7细胞后caveolin-1蛋白表达良好.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)/caveolin-1重组表达质粒,瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞后caveolin-1表达稳定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	康华峰	西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科	84	517	12.0	18.0
2	王西京	西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科	152	868	14.0	19.0
3	代志军	西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科	92	546	13.0	17.0
4	闵卫利	西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科	17	83	6.0	8.0
5	马小斌	西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科	30	184	8.0	12.0
6	刁岩	西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科	15	61	5.0	7.0
7	包兴	西安交通大学医学院第二附属医院肿瘤科	10	28	4.0	5.0