pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒的构建及其在A549细胞中的表达

• 作者: 孙海霞 罗雅玲 谭家余 黄湘
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PSMA7蛋白 人 质粒 真核细胞 肿瘤细胞 培养的 A549细胞
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1329-1332
• 页数: 4页
• 分类号: R730.231.9|R34-33
• 字数: 3656字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2008.11.015

摘要

目的 构建pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒并建立人肺腺癌细胞株A549的稳定表达株.方法 采用RT-PCR法从正常人支气管上皮细胞株HBE135-E6E7中克隆得到PSMA7 cDNA全长序列,将之与pMD18-T载体连接.双酶切和测序鉴定后,再将PSMA7片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)上.构建好的pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,经脂质体转染法转入A549细胞株中,经CA18筛选,得到阳性克隆细胞株,再用RT-PCR及Westem blotting法检测转染后PS-MA7的mRNA及蛋白表达水平.结果 pcDNA3.1(-)/PSMA7质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实.目的 基因PSMA7的序列完全正确,真核表达质粒构建成功.RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1(-)/PSMA7组的PSMA7 mRNA表达水平(2.698±0.661)明显高于未转染组(1.243±0.176)和转染pcDNA3.1(-)组(1.198±0.514,P<0.05),后两者间无明显差异.Western blotting检测同样显示,转染pcDNA3.1(-)/PSMA7组的蛋白表达水平(1.978±0.661)明显高于未转染组(0.891±0.234)和转染pcDNA3.1(-)组(0.782±0.375,P<0.05),后两组间亦无明显差异.结论 成功构建了PSMA7基因的真核表达质粒,并建立了稳定表达PSMA7的A549细胞株,为后续研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭家余	南方医科大学南方医院呼吸内科	20	79	6.0	8.0
2	罗雅玲	南方医科大学南方医院呼吸内科	51	357	11.0	16.0
3	黄湘	嘉应学院医学院基础部病原教研室	10	22	3.0	3.0
4	孙海霞	南方医科大学南方医院呼吸内科	2	6	2.0	2.0