pcDNA3.1(+)-LYVE-1真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达

• 作者: 何怡青 刘一文 杜艳 杨婉薇 杨翠霞 王颖智 马展 高锋
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 透明质酸受体-1 质粒构建 非洲绿猴肾细胞
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 499-503
• 分类号: Q786
• 字数: 4065字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.06.006

摘要

目的 构建人淋巴管内皮细胞特异标志物LYVE-1融合基因表达质粒,观察其在COS-7细胞中的表达,为进一步探讨该标志物在肿瘤淋巴转移中的作用提供工具.方法 从本院结肠癌根治术患者术所取组织中的淋巴结抽提总RNA,RT-PCR扩增LYVE-1基因片段,并将其插入pMD19-T Simple Vector进行测序,鉴定正确后构建pcDNA3.1(+)-LYVE-1并转染COS-7细胞,RT-PCR、Western印迹检测目的 蛋白表达,间接免疫荧光检测该基因表达在COS-7细胞上.结果 成功获取了人淋巴管内皮细胞特异标志物LYVE-1全长cDNA,构建了其真核表达载体pcDNA3.1(+)-LYVE-1,转染COS-7细胞后检测出目的 蛋白的表达,并且证明该基因表达在细胞上.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)-LYVE-1重组质粒,为进一步研究LYVE-1在肿瘤淋巴管转移中的功能提供了重要的实验材料.