miR-34a靶向调控NOTCH1基因对SW480细胞增殖的影响

• 作者: 于游 张才全 邵新宏
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 微小RNA NOTCH1基因 靶向调节 细胞增殖 结直肠癌
• 年，卷（期）: 2012,（22）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2297-2301
• 分类号: R394.3|R730.23|R735.35
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 通过生物信息学预测,NOTCH1为miR-34a特异性靶基因.构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3 '-UTR域荧光素酶报告载体.通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34a与NOTCH1的3’-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响；免疫印迹技术检测miR-34a对NOTCH1蛋白表达的影响.采用MTT法及流式细胞检测转染miR-34a对SW480细胞增殖的影响.结果 经过酶切及基因测序鉴定,NOTCH1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒构建成功；荧光素酶结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的SW480组53.4％ (P=0.003 8);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的HEK293组145％(P=0.002 1),说明miR-34a有与NOTCH1的3’-UTR位点相结合.免疫印迹结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物,NOTCH1蛋白的表达水平是未处理SW480组下降53.6％(P＜0.05)；而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物,NOTCH1蛋白的表达水平较未处理HEK293组升高78.9％ (P =0.03),说明miR-34a负性调控NOTCHl蛋白的表达.miR-34a过表达的SW480细胞较未处理的SW480的生长速度明显减慢(P＜0.05),且阻滞在G0～G1期,说明miR-34a过表达后能抑制SW480细胞增殖.结论 miR-34a负性靶向调控NOTCH1基因的表达而抑制SW480细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张才全	重庆医科大学附属第一医院胃肠外科	161	742	13.0	18.0
2	于游	重庆医科大学附属第一医院胃肠外科	7	60	4.0	7.0
3	邵新宏	重庆医科大学附属第一医院胃肠外科	3	9	1.0	3.0