miR-34a通过靶向ATG7调节结直肠癌细胞自噬与增殖

• 作者: 文彩艳 李晓霞
• 学科: 医学
• 关键词: 结直肠癌 miR-34a 自噬 增殖 自噬相关基因7
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 299-306
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13267/j.cnki.syzlzz.2022.051

摘要

目的 探讨miR-34a对结直肠癌细胞自噬和增殖的调控机制。方法 采用实时定量反转录PCR检测2019年5月至2020年5月期间中国医科大学附属第四医院结直肠癌手术切除的30例结直肠癌组织以及相应癌旁组织中miR-34a的表达水平，同时检测结直肠癌细胞（RKO、LoVo、SW480和SW620）和人正常结肠上皮细胞（FHC）中miR-34a的表达水平。通过pcDNA3.1-miR-34a转染结直肠癌细胞株SW480以过表达miR-34a。CCK-8法检测细胞活性。Westernblot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubular associated protein 1 light chain 3，LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ和自噬相关基因7（autophagy associated gene7，ATG7）的表达。免疫荧光检测LC3荧光斑点表达。Starbase数据库分析miR-34a与ATG7的相关性，并采用荧光素酶报告基因实验验证miR-34a与ATG7的结合情况。SW480细胞共转染pcDNA3.1-miR-34a和pcDNA3.1-ATG7后，CCK-8法检测细胞活性，克隆形成实验检测细胞增殖水平。结果 miR-34a在结直肠癌组织的表达低于相应癌旁组织，在结直肠癌细胞（RKO、LoVo、SW480和SW620）中的表达低于FHC细胞（均P<0.05）。过表达miR-34a72h后SW480细胞活性降低（P<0.01），自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低（P<0.01），免疫荧光显示LC3荧光斑点减少（P<0.01）。过表达miR-34a24h后SW480细胞ATG7mRNA表达降低（P<0.01）。Starbase分析结果表明，miR-34a可以靶向结合ATG7。荧光素酶报告基因实验显示，miR-34a抑制野生型ATG7-3' UTR质粒转染的荧光素酶活性（P<0.01），而对突变型ATG7-3’UTR质粒转染的荧光素酶活性无影响（P>0.05）。共转染pcDNA3.1-miR-34a和pcDNA3.1-ATG7 72h后，SW480细胞活性相对增加（P<0.01），细胞增殖能力增强（P<0.01）。结论 miR-34a通过靶向ATG7抑制结直肠癌细胞自噬和增殖。