PCR-SSCP检测白血病患者C/EBPξ基因突变方法学建立

• 作者: 丁金国 程旻 陶洋 顾红兵
• 来源期刊: 临床医学工程
• 学科: 医学
• 关键词: C/EBPξ基因突变 PCR SSCP 白血病
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 2123-2125
• 页数: 3页
• 分类号: R733.7
• 字数: 2785字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-4659.2012.12.2123

摘要

目的 建立一种快速、批量筛查白血病患者骨髓C/EBPξ基因外显子突变的多聚酶链反应-单链构象多态性(PCRSSCP)分析方法 方法 用Bio-Rad iCycler梯度PCR仪对25 μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶等浓度及反应条件进行优化,并用2％琼脂糖电泳检验产物质量.在此基础上,再对中性聚丙烯酰胺凝胶浓度、上样缓冲液种类、上样量、上样次数及相隔时间、PCR产物稀释倍数、电压、电泳温度等因素进行探讨.同时比较80个健康体检者外周血与20个胸外科良恶性肿瘤患者肋骨骨髓DNA的PCR-SSCP图谱.结果 25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶浓度分别为1.5～2.0mM和1.0～1.5U,退火温度为54 ℃～57℃时PCR扩增效率高;应用8％～10％非变性聚丙烯酰胺凝胶,低离子强度(LIS)上样缓冲液,PCR产物稀释4～5倍,上样量为5～10μL,同一块凝胶相隔0.5～1.0小时可上样2次产物,电压为320V挂冰,室温或4℃电泳5～7小时,SSCP分析可得到较为满意的图谱.80例健康体检者外周血与20例正常肋骨骨髓DNA的C/EBPξ基因图谱相同.结论 可以用正常体检者外周血DNA代替正常肋骨骨髓DNA行SSCP分析,作为C/EBPξ基因突变检测的对照图谱,两次上样的PCR-SSCP方法节约了试剂、时间、人力,可用于快速大量筛查白血病患者C/EBPξ基因突变.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾红兵	江苏省镇江市第一人民医院检验科	2	14	1.0	2.0
2	程旻	江苏省镇江市第一人民医院检验科	1	1	1.0	1.0
3	陶洋	江苏省镇江市第一人民医院检验科	2	13	1.0	2.0
4	丁金国	江苏省镇江市第一人民医院检验科	2	2	1.0	1.0