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摘要:
目的 建立一种快速、批量筛查白血病患者骨髓C/EBPξ基因外显子突变的多聚酶链反应-单链构象多态性(PCRSSCP)分析方法 方法 用Bio-Rad iCycler梯度PCR仪对25 μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶等浓度及反应条件进行优化,并用2%琼脂糖电泳检验产物质量.在此基础上,再对中性聚丙烯酰胺凝胶浓度、上样缓冲液种类、上样量、上样次数及相隔时间、PCR产物稀释倍数、电压、电泳温度等因素进行探讨.同时比较80个健康体检者外周血与20个胸外科良恶性肿瘤患者肋骨骨髓DNA的PCR-SSCP图谱.结果 25μL PCR反应体系中的Mg++、Taq酶浓度分别为1.5~2.0mM和1.0~1.5U,退火温度为54 ℃~57℃时PCR扩增效率高;应用8%~10%非变性聚丙烯酰胺凝胶,低离子强度(LIS)上样缓冲液,PCR产物稀释4~5倍,上样量为5~10μL,同一块凝胶相隔0.5~1.0小时可上样2次产物,电压为320V挂冰,室温或4℃电泳5~7小时,SSCP分析可得到较为满意的图谱.80例健康体检者外周血与20例正常肋骨骨髓DNA的C/EBPξ基因图谱相同.结论 可以用正常体检者外周血DNA代替正常肋骨骨髓DNA行SSCP分析,作为C/EBPξ基因突变检测的对照图谱,两次上样的PCR-SSCP方法节约了试剂、时间、人力,可用于快速大量筛查白血病患者C/EBPξ基因突变.
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内容分析
关键词云
关键词热度
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文献信息
篇名 PCR-SSCP检测白血病患者C/EBPξ基因突变方法学建立
来源期刊 临床医学工程 学科 医学
关键词 C/EBPξ基因突变 PCR SSCP 白血病
年,卷(期) 2012,(12) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 2123-2125
页数 3页 分类号 R733.7
字数 2785字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1674-4659.2012.12.2123
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 顾红兵 江苏省镇江市第一人民医院检验科 2 14 1.0 2.0
2 程旻 江苏省镇江市第一人民医院检验科 1 1 1.0 1.0
3 陶洋 江苏省镇江市第一人民医院检验科 2 13 1.0 2.0
4 丁金国 江苏省镇江市第一人民医院检验科 2 2 1.0 1.0
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研究主题发展历程
节点文献
C/EBPξ基因突变
PCR SSCP
白血病
研究起点
研究来源
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
临床医学工程
月刊
1674-4659
44-1655/R
大16开
广东省广州市广州大道中1307号
46-130
1994
chi
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