应用FITC系统建立非均衡竞争游离三碘甲腺原氨酸(FT3)化学发光法

• 作者: 刘萍 孔海霞 宋启超 王世鑫 田云霞 翁亚光
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 异硫氰酸荧光素 非均衡竞争 游离三碘甲腺原氨酸 类似物 多克隆抗体 化学发光分析法
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 201-205
• 分类号: R392-33|R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法.方法 以T3-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化并联接辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP).用FITC标记T3-类似物.采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,通过非均衡竞争法原理,固相抗原与血清中FT3竞争结合抗T3抗体-HRP,通过标准曲线计算FT3浓度,建立方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine serum gamma globulin,BGG)包被(非FITC系统)的检测系统相比较.将本方法应用于临床120份血清标本的检测,定量结果与德国罗氏2010电化学发光全自动免疫分析系统( Elecsys 2010)定量结果进行比较.结果 抗体经酶联免疫吸附实验证明对T3、具有高度特异性.应用FITC系统建立的非均衡竞争化学发光免疫分析标准曲线的线性R＞0.99,线性范围0.25～50 pg/ml,分析灵敏度为0.25 pg/ml,精密度测试批内、批间变异系数CV＜5％,检测结果优于非FITC系统的检测.对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys 2010定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数r =0.962 2,两者的测定值无显著性差异.结论 制备的抗人T3多克隆抗体特异性强,以FITC系统为平台建立的非均衡竞争FT3检测化学发光法具有精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,达到临床测定的需求,可代替进口化学发光产品用于临床样本的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔海霞	重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室	10	28	3.0	4.0