荧光素酶标记的EL4细胞的制备及淋巴瘤动物模型构建

• 作者: 喻青
• 来源期刊: 医学信息
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 荧光素酶基因 小鼠淋巴瘤细胞EL4 生物发光
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 84-86
• 分类号: R2
• 字数: 4653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-1959.2012.03.082

摘要

目的 制备稳定表达萤火虫荧光素酶(Luciferase)的小鼠T细胞白血病/淋巴瘤细胞系(EL4),在细胞水平检测其生物发光能力;建立发光淋巴瘤动物模型,在整体动物水平观察肿瘤的生长及转移.方法 通过阳离子脂质体法将含荧光素酶(Luc)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体四质粒系统共转染入病毒包装细胞293T,24h后在荧光显微镜下观察GFP表达情况,监测转染效率.72h收集病毒上清,浓缩后以MOI﹦8感染EL4细胞,在荧光显微镜下和应用流式细胞仪(FACS)观察感染情况.通过流式细胞分选仪无菌条件下筛选出表达GFP的EL4细胞,进行大规模扩增培养并对转染前后的细胞进行生物特性分析和比较.在体外用活体成像技术(in vivo imaging)评价其稳定发光能力.C57BL/6小鼠皮下和尾静脉接种发光细胞,构建淋巴瘤小鼠模型,活体内观察肿瘤的生长和转移情况.结果 慢病毒载体系统转染293T细胞24h后在荧光显微镜下观察到GFP表达,病毒滴度测定为8.4×107 TU/ml.感染EL4细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达,FACS分析转导效率为96.5%.筛选转染后的稳定克隆并扩增细胞,分析其生物学特性与EL4细胞无明显差异(P>0.05).活体成像系统分析感染后的EL4细胞释放的光子量与细胞数量成正相关(R2=0.9896).利用活体成像观察到了皮下移植瘤的生长,并且光子强度随肿瘤的增大而增强;尾静脉接种小鼠后通过活体成像,能在不同时期动态观察到肿瘤的组织、器官转移.结论 我们成功制备了荧光素酶标记的EL4细胞并且构建了生物发光淋巴瘤动物模型.该模型可以非侵入性地动态检测活体内白血病/淋巴瘤的演进过程,为示踪肿瘤体内生长、转移,研究肿瘤发展机制及最佳治疗策略的选择提供了新的手段和工具.

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序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	喻青		2	1	1.0	1.0