用合成多肽为半抗原制备Bt Cry1Ab的单克隆抗体

• 作者: 姜国华 张岐蜀 李玲 段伟 胡小元
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: Bt Cry1Ab 单克隆抗体 合成肽
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 475-482
• 页数: 8页
• 字数: 5524字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.04.013

摘要

由于Bt Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac晶体蛋白之间具有很高的同源性(82％～90％),采用常规的单抗制备方法很难制取特异性强的Bt Cry1Ab单抗,为了制备抗Bt Cry1Ab蛋白的特异性单克隆抗体(MAB),本研究从NCBI获得了Bt Cry1Ab蛋白的氨基酸序列,根据ANTHEPORT和DNAStar软件对其抗原性、亲水性和表位性分析结果选定Bt Cry1Ab特异性肽段进行人工合成,并将其偶联于匙孔血蓝蛋白(KLH)免疫动物,应用细胞融合技术制备了抗该肽段的杂交瘤细胞22株.通过ELISA试验从中筛选出与Bt Cry1Ab天然蛋白产生特异性反应的单克隆抗体杂交瘤细胞株一株(3A10).经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1型;轻链属κ型；杂交瘤细胞株染色体数目为89～108条；用其制作的腹水对Bt Cry1Ab合成肽的反应效价为1∶1×107;对Bt Cry1Ab天然蛋白的反应效价为1∶1×104;纯化后的抗体对Bt Cry1Ab合成肽的效价为1∶1×108;对Bt Cry1Ab天然蛋白的效价为1∶2×104.抗体的相对亲和力为0.5 μg/mL,对Bt Cry 1Ab蛋白的最低可检测值为10 ng/mL.ELISA结果显示,3A10杂交瘤细胞株所分泌的MAB能特异性识别合成肽和Bt Cry1Ab蛋白,而对同源的Cry1Ac和Cry1Aa蛋白无交叉反应；本研究所制备的Bt Cry1Ab单克隆抗体能够对常规棉和抗虫棉(Gossypium hirsutum L.)进行有效的区分,并且能特异性的识别其中的Bt Cry1Ab蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玲	中国农业科学院生物技术研究所	68	200	8.0	12.0
2	张岐蜀	中国农业科学院生物技术研究所	12	56	4.0	7.0
3	姜国华	中国农业科学院生物技术研究所	11	46	4.0	6.0
4	胡小元	中国农业科学院生物技术研究所	25	59	4.0	6.0
5	段伟	中国农业科学院生物技术研究所	6	8	2.0	2.0