人类精液 DNA 提取方法的探讨及影响因素分析▲

• 作者: 吴华 李慕军 江莉 覃莉
• 来源期刊: 广西医学
• 学科: 医学
• 关键词: 男性不育 精液 DNA提取方法
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 406-410
• 分类号: R698.2
• 字数: 5056字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11675/j.issn.0253-4304.2013.04.07

摘要

目的建立一种最优化的提取高质量人类精液基因组DNA的方法,为辅助生殖技术男性不育分子生物学科学研究提供技术支持.方法提取人类精液基因组DNA,优化设计实验步骤,研究初始样品类型、初始样品量、二硫苏糖醇(DTT)剂量、蛋白酶K(PK)消化时间、混匀震荡等因素对DNA的提取效果的影响,应用核酸定量和琼脂糖凝胶电泳分析比较各组提取效果的差异.结果应用自然分层后的精液沉淀提取DNA较原始精清可获得较高浓度的DNA.初始样品量为100~150μl时可获得较好的提取效果,随着样本量的增加,DNA提取效果逐渐下降.在样本中加入DTT可以明显提高DNA产量,DTT的加入利于DNA裂解及提取,且增加了DNA的稳定性. PK适宜消化时间为5~8 h;时间过短(<2 h),DNA裂解不全提取效果较差,时间过长(>12 h)则会造成DNA降解.在PK消化时,摇床震荡可以提高DNA产量.结论应用自然分层后的精液沉淀提取DNA,当初始样品量为100~150μl时,在样本中加入1M DTT 20μl,PK消化时间为5~8 h,并在消化时摇床震荡,可以获得高质量的基因组DNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李慕军	广西医科大学第一附属医院生殖中心	116	677	13.0	21.0
2	江莉	广西医科大学第一附属医院生殖中心	43	233	8.0	12.0
3	吴华	广西医科大学实验中心	23	68	4.0	7.0
4	覃莉	广西医科大学第一附属医院生殖中心	20	79	5.0	7.0