甘蔗叶绿体DNA的提取方法及其验证分析

• 作者: 周会 周珊 岑华飞 张革民 杨翠芳 段维兴 罗霆 高轶静 黄玉新
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 甘蔗 叶绿体DNA 提取 trnL基因 改良的DNase Ⅰ差速离心法
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 546-550
• 页数: 5页
• 分类号: S566.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.4.546

摘要

[目的]探索适于普通实验室条件的甘蔗叶绿体DNA(cpDNA)提取方法,为甘蔗叶绿体分子生物学研究提供参考.[方法]参考水稻、小麦等作物cpDNA的DNase Ⅰ差速离心处理法,采用改良的DNase Ⅰ差速离心法提纯甘蔗cpDNA,并对其trnL基因序列进行比对分析,证实所提取cpDNA的可行性.[结果]采用改良的DNase Ⅰ差速离心处理法提取能得到量多、杂质少的cpDNA,用Eppendorf蛋白核酸测定仪检测,平均每克甘蔗样可提取2.71 μg cpDNA,OD260/OD280为1.79～1.90.对提取的cpDNA的trnL基因序列进行比对分析,证实参试的甘蔗栽培种、斑割复合体后代及其回交材料的叶绿体trnL基因与已报道的甘蔗栽培种NCo 310、SP-80-3280和割手密HN0046的trnL基因相似度均在99.0％以上,并在381、386、389、392、393、400、488、490 bp等8个位点上检测出碱基突变、插入和缺失现象.[结论]采用改良的DNase Ⅰ差速离心处理法提取甘蔗叶绿体DNA具有可行性,提取的甘蔗cpDNA完全可以用于后续的分子水平研究.