ErbB4基因miRNA慢病毒载体的构建及其在小鼠海马齿状回的表达

• 作者: 宫泽辉 李树玲 颜慧
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 ErbB4 海马 齿状回
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 分类号: R963
• 字数: 3243字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2013.01.006

摘要

目的 构建靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体,包装产生高滴度慢病毒并观察其感染小鼠海马齿状回基因的表达.方法 将靶向ErbB4基因的miRNA干扰质粒利用Gateway重组技术构建慢病毒表达质粒,并与慢病毒包装系统共转染HEK293T包装细胞,收获上清并浓缩得到慢病毒浓缩液,通过测定绿色荧光蛋白(GFP)表达水平测定其滴度.所得慢病毒浓缩液经立体定位微量注射感染小鼠海马齿状回.观察鼠脑冰冻切片基因表达情况,并用神经元标志物神经元核抗原(NeuN)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)特异性抗体行免疫染色分析转导的细胞类型.结果 阳性克隆测序结果与设计序列一致,说明靶向ErbB4基因的miRNA慢病毒干扰载体构建成功.包装收获慢病毒.浓缩的慢病毒包装上清感染HEK293T细胞后,流式细胞术检测GFP阳性率,计算得慢病毒活性滴度为1.0×1012转导单位(TU)·L-1.小鼠海马齿状回立体定位微量注射1.0×1012 TU· L-1慢病毒6个月后,观察到注射部位外源基因的显著表达.免疫荧光染色显示,慢病毒转导的细胞多呈NeuN标记阳性,并与GFAP的表达不重叠.结论 靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体构建成功,获得了靶向ErbB4基因的高滴度miRNA慢病毒颗粒,并实现了脑实质的局部长期稳定转导,慢病毒转导的主要细胞类型为神经元.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宫泽辉	军事医学科学院毒物药物研究所新药评价研究室	96	528	12.0	18.0
2	李树玲	军事医学科学院毒物药物研究所新药评价研究室	12	46	4.0	6.0
4	颜慧	军事医学科学院毒物药物研究所新药评价研究室	14	53	5.0	7.0