基于时间分辨荧光免疫技术的VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂筛选模型的建立及应用

• 作者: 周彬 张珏 张艺 朱兰 朱雪 王柯 黄飚
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 生物学
• 关键词: 血管内皮生长因子受体2 酪氨酸激酶 时间分辨荧光免疫分析 高通量药物筛选
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 41-45
• 页数: 5页
• 分类号: Q-31
• 语种: 中文

摘要

利用原核表达系统表达重组蛋白VEGFR-2 TK,通过Ni-NTA亲和层析柱纯化获得目的蛋白,以VEGFR-2 TK作为靶点,以TRFIA技术作为检测手段,对反应条件进行优化(底物浓度,ATP,离子浓度),建立针对VEGFR-2酪氨酸激酶的高通量药物筛选模型.选取已报道的VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂SU11248对该药物筛选模型进行验证.成功表达及纯化获得高活性VEGFR-2 TK重组蛋白,然后经过优化获得高通量药物筛选模型反应条件:VEGFR-2 TK最适浓度为250ng/孔,底物PolyE4Y的最佳浓度为10 μg/ml,ATP的最佳浓度为60 μmol/L,Mg2+的最佳浓度为40μmol/L,Mn2+的最佳浓度为20μmol/L.用已知VEGFR-2 TK抑制剂SUI1248对模型进行验证,IC50为141.6 nmol/L,与文献中报道一致.成功构建VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂筛选模型,其灵敏度高,结果稳定,适用于高通量药物筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张珏		32	168	8.0	11.0
2	黄飚		93	582	13.0	17.0
3	张艺		28	140	7.0	10.0
4	王柯		11	30	3.0	5.0
5	周彬		16	70	5.0	7.0
6	朱雪		1	0	0.0	0.0
7	朱兰		1	0	0.0	0.0