“补肾益肝活血方”对小鼠骨髓基质细胞成软骨分化相关基因表达的影响

• 作者: 卢悟广 席志鹏 徐文强 王庚启 胡春萍 蔡雪婷 谢林
• 来源期刊: 中国中医骨伤科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质细胞 软骨分化 血清药理学 基因芯片
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 4-8
• 页数: 5页
• 分类号: R-33
• 语种: 中文

摘要

目的:采用血清药理学方法,从基因水平探索中药补肾益肝活血方影响小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)成软骨细胞分化的机制.方法:取45只昆明大鼠随机分为3组,补肾益肝活血方高、低剂量组分别以含14.67×4g生药/kg、14.67g生药/kg的水溶液2mL灌胃,对照组以等量生理盐水2mL灌胃,2次/d,连续给药3d后,腹主动脉采血制备血清.另从4只昆明小鼠骨髓中分离出BMSCs,贴壁法培养传代,取第3代BMSCs分为4组:对照组、阳性组及高、低剂量中药血清诱导组,依次以空白血清、成软骨诱导阳性药及高、低剂量中药血清诱导BMSCs成软骨细胞分化.苏木精-伊红染色观察各组软骨分化情况,基因芯片技术分析成软骨分化基因表达差异谱,并用Real time PCR验证.结果:苏木精-伊红染色显示阳性组及高、低剂量中药血清诱导组均能促进BMSCs成软骨细胞分化.阳性组及高、低剂量中药血清诱导组中软骨细胞相关的金属基质蛋白酶-3(MMP3)、含纤蛋白样表皮生长因子细胞外基质蛋白-1(EFEMPI)均为下调基因(下调倍数＞2).Real time PCR示阳性组及高、低剂量中药血清诱导组中Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、SOX9基因及糖胺聚糖(Aggrecan)的表达均增高,表明三组均有软骨生成,且MMP3、EFEMP1的表达下降,进一步验证了基因芯片结果.结论:补肾益肝活血方含药血清能有效诱导BMSCs成软骨细胞分化,其作用机制很可能与MMP3、EFEMP1介导的通路有关.