艾洛替尼耐药的卵巢癌SKOV3细胞系的建立及其耐药特性

• 作者: 任志广 彭晖 李亚里 李新颖 贾砚寒 赵青 魏寅祥 黎燕
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 艾洛替尼 卵巢癌 耐药 酪氨酸激酶抑制剂
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 268-274
• 页数: 7页
• 分类号: Q279
• 字数: 5102字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2013.02.024

摘要

目的 通过体外建立艾洛替尼(Erl)耐药的人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3/Erl,并探讨其耐药机制,为卵巢癌靶向性治疗的耐药性研究提供细胞模型及依据.方法 采用逐步递增联合大剂量冲击法诱导细胞,取对数生长期的SKOV3细胞,从Erl 1 μmol·L-1开始处理,以Erl 2,4,8,16和 25 μmol·L-1反复换液传代,最终维持浓度为10 μmol·L-1,共诱导10个月.取SKOV3和SKOV3/Er1细胞,加入不同浓度艾洛替尼、紫杉醇、米托蒽醌、表柔比星、拓扑替康、长春新碱和甲氨蝶呤等药物,作用72 h,磺酰罗丹明B染色法检测耐药倍数.流式细胞术检测SKOV3细胞和SKOV3/Er1细胞的细胞周期.Western印迹法检测Erl刺激对敏感和耐药细胞中表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路产生的变化;流式细胞术检测SKOV3/Er1细胞表面ATP结合盒(ABC)转运蛋白中P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达以及Toll样受体4(TLR4)的表达;检测脂多糖(LPS)刺激对紫杉醇耐受的SKOV3/Erl细胞的敏感度.结果 Erl对SKOV3细胞的IC50为(9.54±1.04)μmol·L-1,而对SKOV3/Erl细胞的IC50为(21.63±1.05)μmol·L-1,耐药倍数约为2.26,诱导成功的SKOV3/Erl对紫杉醇、长春新碱、米托蒽醌和甲氨蝶呤的耐药倍数均在3倍以上.与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl 细胞G0/G1期比例上升,S期比例下降,G2/M期几乎无变化.Erl刺激后,与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl细胞中p-HER1,p-ERK与p-AKT水平上调.SKOV3/Erl细胞膜上Pgp,BCRP和MRP1表达有微弱上调,而TLR4显著上调;脂多糖可强烈刺激SKOV3/Erl细胞增殖,并且对紫杉醇杀伤起到保护作用,而亲本细胞则相对不敏感.结论 成功建立了对Erl耐受的人卵巢癌耐药细胞SKOV3/Erl.其表现出的多药耐药机制可能与TLR4蛋白表达上调有关.