重组CYP2D26主要B细胞表位在Ⅱ型自身免疫性肝炎小鼠模型构建中的效应研究

• 作者: 何秋玲 刘馨 王辉辉 马雁冰
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 关键词: 肝炎,自身免疫性 表位,B淋巴细胞 细胞色素P450 CYP2D6
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 字数: 3462字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.01.006

摘要

目的 研究在大肠杆菌中以重组病毒样颗粒形式表达的人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D6主要抗原表位aa262-270免疫小鼠后对构建小鼠自身免疫性肝炎模型的效应.方法 设计人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白主要抗原表位aa262-270 (WDPAQPPRD)的下负链寡核苷酸片段,经退火后插入表达乙肝核心蛋白 HBcAg的质粒pNP中(pNP质粒由pThioHisA质粒插入HBcAg基因片段构建而成).构建成质粒pNP-AIH2;转染大肠杆菌DH5α感受态细胞；以IPTG诱导重组蛋白表达,经硫酸铵沉淀、洗涤,密度梯度离心纯化和脱盐后,肌肉注射免疫小鼠3次,以ELISA和western blot检测免疫后小鼠特异性抗体的产生和水平,通过转氨酶检测和肝脏石蜡切片HE染色观察炎症反应.结果 SDS-PAGE结果显示重组菌诱导表达的目的蛋白分子量为19kD,与预期相符;电镜证实其以可溶性的病毒样颗粒形式存在;ELISA显示,免疫小鼠血.清与包被的肝脏匀浆蛋白特异反应,检测到持续存在的特异抗体,滴度至少为1∶2000; western blot检测表明,抗血清在分子量约为55 kD的地方产生了一个特异的条带,与小鼠CYP2D6蛋白大小一致.与正常对照相比,实验组小鼠转氨酶水平未明显升高,肝切片HE染色没有观测到明显的病理特征.结论 携带人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白 CYP2D26主要表位的病毒样颗粒免疫小鼠后,可刺激产生较强的特异抗体水平,但在观测时间内,未见诱导小鼠产生明显的肝脏炎症反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马雁冰	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	14	56	5.0	6.0
2	刘馨	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	18	62	5.0	7.0
3	王辉辉	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	1	0	0.0	0.0
4	何秋玲	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	1	0	0.0	0.0