西藏小型猪胰岛细胞体外分离和纯化方法

• 作者: 唐华 戚文军 汪亦男 胡强 那顺巴雅尔 顾为望
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 西藏小型猪 胰岛细胞 分离 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 126-129
• 页数: 4页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 2979字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.02.009

摘要

目的 确定成体西藏小型猪胰岛细胞体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛细胞.方法 对比不同质量浓度的胶原酶(1 mg/ml,2 mg/ml,3 mg/ml,4 mg/ml)和同一质量浓度不同时间点(0 min,15 min,30 min,45 min,60 min,75 min,90 min)分离获得胰岛细胞的数量和效果;使用Ficoll400密度梯度离心、淋巴分离液分离、离心和静置4种方法纯化胰岛细胞悬液,比较最终收集到的胰岛细胞数量和效果；用DTZ染色计算胰岛细胞的纯度；用AO/PI染色计算胰岛细胞存活率.结果 确定了不同质量浓度的胶原酶获取胰岛细胞的最佳时间,胶原酶l mg/ml和2 mg/ml组为45 min,3 mg/ml和4 mg/ml组为30 min,各组在最佳时间点获得胰岛细胞的数量最多的为1 mg/ml组,胰岛细胞形态完整；4种纯化方法中,收集的胰岛细胞数量由多到少依次为静置组＞ Ficoll400密度梯度离心组＞离心组＞淋巴分离液离心组.经AO/PI染色后检测胰岛细胞的存活率为95.00％以上.结论 在组织块剪碎消化的情况下,胶原酶质量浓度1 mg/ml、消化时间45 min的分离条件可获得数量较多的胰岛细胞,Ficoll400密度梯度离心的纯化手段收集到的胰岛细胞效果最好.