亨廷顿相关蛋白1对MDA-MB-231细胞生长抑制及其机制的探讨

• 作者: 吴建中 唐金海 宋雪 曹海霞 朱丽伟 马蓉
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 亨廷顿相关蛋白1 凋亡 抑制 MDA-MB-231
• 年，卷（期）: 2013,（18）
• 所属期刊栏目: 实验研究/论著
• 页码范围: 1399-1404,1409
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5269.2013.18.006

摘要

目的:探讨HAP1基因过表达对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、体外迁移侵袭和细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:使用实时荧光定量PCR检测30例女性乳腺癌患者肿瘤组织与癌旁组织中HAP1的表达情况.通过转染的方法将逆转录病毒pBabe-puro(嘌呤霉素)HAP1质粒和pBabe-puro质粒导入人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,嘌呤霉素筛选稳定表达两质粒的细胞系,荧光定量PCR和蛋白质印迹法鉴定是否成功构建HAP1过表达细胞系;细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞的生长增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,荧光定量PCR检测凋亡相关基因表达情况.结果:荧光定量结果显示,约75％正常组织中HAP1表达比相应癌组织表达高3倍以上.成功构建稳定表达pBabe-HAP1的MDA-MB-231-pBabe-puro-HAP1细胞模型.CCK-8检测72 h的细胞存活率MDA-MB-231-pBabe-puro-HAP1为(74.9±6.0)％,低于MDA-MB-231细胞(100.0±0.0)％,P=0.019,也低于MDA-MB-231-pBabe-puro细胞(99.8±6.0)％,P=0.007;细胞克隆形成实验结果显示,MDA-MB-231-pBabe-puro-HAP1组的克隆形成率为(9.3±1.9)％,明显低于MDA-MB-231细胞组(16.0±2.6)％,P=0.024,也低于MDA-MB-231-pBabe-puro细胞组(15.8±2.5)％,P=0.022;Transwell小室侵袭和迁移实验表明,MDA-MB-231-pBabe-puro-HAP1组的侵袭(F=0.339,P=0.725)和迁移(F=0.844,P=0.475)能力无明显改变;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,MDA-MB-231-pBabe-puro-HAP1凋亡率与MDA-MB-231和MDA-MB-231-pBabe-puro细胞组差异无统计学意义,F=0.564,P=0.596;细胞周期结果发现,HAP1组细胞周期中G2M期所占比例为(14.84±0.90)％,与pBabe组(11.76±0.93)％和MDA-MB-231组(11.19±0.94)％相比明显增加.3组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax和Survivin的表达差异无统计学意义,F=0.564,P=0.596.结论:HAP1可能通过细胞周期阻滞抑制乳腺癌细胞的生长,其降低或缺失可能引起乳腺癌的发生发展.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐金海	南京医科大学附属江苏省肿瘤医院普外科	43	134	7.0	9.0
2	吴建中	南京医科大学附属江苏省肿瘤医院临床肿瘤研究中心	17	61	5.0	7.0
3	马蓉	南京医科大学附属江苏省肿瘤医院临床肿瘤研究中心	14	28	4.0	4.0
4	曹海霞	南京医科大学附属江苏省肿瘤医院临床肿瘤研究中心	14	70	5.0	8.0
5	宋雪	南京医科大学附属江苏省肿瘤医院普外科	2	3	1.0	1.0
6	朱丽伟	南京医科大学附属江苏省肿瘤医院普外科	3	4	1.0	1.0