稳定表达hSOD1G93A基因的肌萎缩侧索硬化体外细胞培养模型的建立与鉴定

• 作者: 樊东升 高文超
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 肌萎缩侧索硬化 超氧化物歧化酶 基因突变 VSC4.1细胞系 转染
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 12-15,后插3
• 页数: 5页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2013.03.003

摘要

目的 建立并鉴定稳定表达G93A型突变人超氧化物歧化酶(hSOD1G93A)基因的肌萎缩侧索硬化体外细胞培养模型.方法 利用活化的树突状聚合物将空质粒、hSOD1WT、hSODIG93A基因转染入VSC4.1细胞内,G418抗性筛选,从而建立稳定的肌萎缩侧索硬化体外细胞模型.用免疫荧光技术检测VSC4.1细胞系运动神经元标志物.蛋白印迹实验鉴定hSOD1WT蛋白、hSOD1G93A蛋白的表达.MTT法检测细胞模型生长曲线.结果 VSC4.1细胞分化前表达Class Ⅲ β-Tubulin、MNR2,分化后表达Class Ⅲ β-Tubulin、MNR2、NF200、MAP2等运动神经元标志物.VSC4.1-hSOD1WT、VSC4.1-hSOD1 G93A细胞均过表达人来源的SOD1,而VSC4.1-mock则不表达.与VSC4.1-mock、VSC4.1-hSOD1WT相比,VSC4.1-hSODI G93A生长缓慢,在48、72 h细胞活力均低于VSC4.1-mock(P=0.031,P=0.000)、VSC4.1-hSOD1WT(P=0.001,P=0.000),其余时间点无明显差异(P＞0.05).结论 成功建立稳定表达hSOD1WT、hSOD1G93A基因的VSC4.1细胞系,为进一步研究肌萎缩侧索硬化的发病与治疗奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	樊东升	北京大学第三医院神经科	409	2272	21.0	30.0
2	高文超	北京大学第三医院神经科	1	0	0.0	0.0