褶纹冠蚌防御素基因特征与表达

• 作者: 宁瑞红 春根 王鹤 程周玉 胡向萍 胡宝庆
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 褶纹冠蚌 防御素 基因表达 序列结构 抗菌肽 嗜水气单胞菌
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1188-1196
• 页数: 9页
• 分类号: Q959.215
• 字数: 6534字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2013.01188

摘要

褶纹冠蚌(Cristaria plicata)样本壳长(9.50±1.05) cm、壳高(6.45±0.81) cm,暂养1周。40只随机分成试验组和对照组,每组20只。用Trizol 法提取经诱导刺激后0、6、12、24、36、48 h的血液、外套膜、鳃、肝胰腺组织RNA,构建褶纹冠蚌cDNA文库并从中获得防御素基因cDNA全长序列。结果表明,褶纹冠蚌防御素序列全长为514 bp,其中5’ UTR 有57 bp；3’ UTR 有242 bp,含有一个poly(A)尾；开放阅读框长度为192 bp,编码63个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白 N 端为1个由23个氨基酸构成的信号肽,成熟肽由40个氨基酸组成,理论等电点为8.72,分子量为7.13 kD。三级结构预测显示其由一个α螺旋和两个β折叠片组成,形成典型的 CSαβ结构。通过注射109 cell/mL 的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激褶纹冠蚌,半定量分析PCR对褶纹冠蚌血液、外套膜、鳃和肝胰腺组织的防御素基因表达,结果表明,诱导前防御素基因在外套膜组织中表达量最高,约为血液和鳃的1.25倍,肝胰腺次之。在诱导0、6、12、24、36、48 h后,对照组的防御素基因表达量在血液和鳃中无明显变化,而在外套膜和肝胰腺中则呈现先略有下降而后上升；试验组防御素基因在血液中12 h 时表达量最高,随后略有下降,而在外套膜、鳃和肝胰腺组织中表达量均在0h 时出现峰值,而后呈现下降趋势；外套膜和鳃的表达量分别在24 h 和36 h 略有上升。本研究通过分析褶纹冠蚌防御素基因全序列,并利用嗜水气单胞菌对褶纹冠蚌进行注射感染,探讨防御素基因的表达规律,以期为防御素对贝类非特异性免疫的影响提供基础依据。