毛白杨抗坏血酸过氧化物酶基因PtAPX2的克隆表达及分析

• 作者: 张蕾 李印军 李娜 潘翔 陆海 魏弘宜
• 来源期刊: 北京林业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 毛白杨 抗坏血酸过氧化物酶 克隆 重组表达 酶学性质 表达量分析
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 林学
• 页码范围: 36-44
• 分类号: S792.119|Q943.2
• 语种: 中文

摘要

以毛白杨总RNA为模板反转录得到cDNA,克隆获得抗坏血酸过氧化物酶基因家族中的一个成员PtAPX2864 bp的编码序列.该基因编码的蛋白包含287个氨基酸,理论分子质量为31.78 ku,C末端包含锚定于过氧化物酶体跨膜结构域,推断其为过氧化物酶体定位蛋白.构建了PtAPX2原核表达载体,在大肠杆菌中表达获得了纯化的重组蛋白,并对其进行了酶学性质分析.PtAPX2对抗坏血酸的Km值为(1.37±0.22) mmol/L,Vmax值为(3.95±0.46)mmol/(L·min· mg)；对H2O2的Km值为(0.026±0.003) mmol/L,Vmax值为(1.27±0.03)mmol/(L·min· mg)；该酶在28℃,pH 7.0～7.4时活性最高.实时荧光定量PCR分析表明,PtAPX2在杨树老叶叶肉中表达量最高.对PtAPX2亚细胞定位、底物结合特征、酶学性质及组织特异性表达的分析加深了对木本植物抗氧化机理的认识.