猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因敲除株的构建

• 作者: 李先富 李敏 杜骁杰 潘秀珍 王晶 王玲 王长军 胡丹 郑峰
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪链球菌 真核样丝氨酸/苏氨酸激酶 基因敲除 突变株
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1162-1167
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1
• 字数: 4071字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.12.007

摘要

目的 构建猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)2型强毒株05ZYH33真核样丝氨酸/苏氨酸激酶(eukaryoticlike Ser/Thr kinase,eSTK) stk基因敲除突变株.方法 构建中间为壮观霉素抗性基因(Spcr),两侧为stk编码基因上下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选stk编码基因敲除突变株.结果 组合PCR分析和基因测序结果均显示stk编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除突变株△stk构建成功.逆转录PCR(RT-PCR)证实了stk在转录水平上的缺失.对筛选的突变株进行连续传代培养,证实△stk能够保持稳定的壮观霉素抗性表型.结论 stk基因敲除突变株的成功构建,为阐明该基因在猪链球菌致病过程中的作用奠定基础.