斑马鱼jak2a载体构建及其对红系造血功能影响的初步研究

• 作者: 关军 姜利军 张义成 朱贤敏 肖湘慧 赵磊
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: jak2a基因 定点突变 体外转录 邻联茴香胺染色
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 699-702
• 页数: 4页
• 分类号: R331.2
• 字数: 3678字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2013.06.016

摘要

目的 构建jak2a野生型(wilde type,wt)载体并完成其在斑马鱼体内的过表达,运用邻联茴香胺染色观察其对红系造血的影响,为后续探讨斑马鱼骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disorders,MPD)模型的Jak/Stat信号通路奠定基础.方法 根据jak2a基因GenBank NM_131093序列V581F突变位点上下游序列设计引物,以pGM-T-jak2aV581F质粒载体为模板进行PCR后,用DpnⅠ酶对产物进行消化去除模板,转化感受态细菌DH5α,通过蓝白筛选酶切鉴定阳性菌落,小量提取质粒,NdeⅠ限制性内切酶线性化pGM T-jak2a-wt质粒,运用T7 Transcript Aid酶对jak2a基因进行体外转录及加帽.经凝胶电泳对目的片段进行鉴定.以200 ng/μL浓度jak2a-wt mRNA加帽产物显微注射斑马鱼单胞期受精卵,运用邻联茴香胺染色检测其对红系增殖的影响.结果 完成pGM-T-jak2a V581F的定点突变,成功构建pGM-T-jak2a-wt载体,DNA序列分析的结果与GenBank上的序列(NM 131093)一致,酶切线性化及体外转录加帽pGM-T-jak2a-wt,凝胶电泳鉴定RNA分子大小与预期完全一致.对过表达jak2a的鱼卵进行邻联茴香胺染色,发现斑马鱼卵黄囊及ICM区红细胞明显增多.结论 成功完成斑马鱼pGM-T-jak2a VS81F基因定点突变并体外转录及加帽pGM-T-jak2a-wt,体内过表达jak2a对红系发生有显著影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵磊	华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科	13	9	2.0	2.0
2	张义成	华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科	70	143	7.0	9.0
3	关军	华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科	9	11	2.0	3.0
4	朱贤敏	华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科	5	2	1.0	1.0
5	姜利军	华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科	11	21	2.0	4.0
6	肖湘慧	华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科	1	1	1.0	1.0