链霉菌负调控因子突变筛选系统的构建

• 作者: 冯迟 朱宇 田宇清 谭华荣
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 链霉菌 inoA 报告基因 无痕敲除 隐性基因簇
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 1031-1042
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建用于阻遏链霉菌隐性次级代谢基因簇表达的负调控因子筛选的报告系统.[方法]通过“REDIRECT (Rapid Efficient Directed Recombination Time Saving)”技术结合链霉菌温和噬菌体4BT1整合酶的体内位点特异性重组技术,对链霉菌中多基因进行无痕敲除.以链霉菌隐性次级代谢基因簇中受阻遏的启动子驱动链霉菌中保守的inoA构建报告质粒,针对阻遏次级代谢基因簇表达的负调控基因的突变进行检测,以验证报告系统的可行性.[结果]本研究首先通过对天蓝色链霉菌的肌醇从头合成途径关键酶基因inoA,及合成黄色聚酮类隐性抗生素(yellow cryptic polyketide,yCPK)的途径特异性负调控基因scbR2依次进行了无痕敲除,以构建进一步筛选所用的受体菌,再以scbR2阻遏的cpkO启动子控制inoA的表达构建了报告质粒pIJ8660::PcpkO::inoA.结果显示沉默的cpkO启动子在突变的受体菌中被激活并使inoA得到了表达,可以使inoA的光秃型突变表型在不添加肌醇的培养基上恢复到产孢的野生型表型.[结论]inoA可以作为新的链霉菌普遍适用的报告基因,可方便地通过表型变化的观察进行筛选,同时可针对性对负调控基因的突变进行检测,可应用于链霉菌隐性抗生素激活的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭华荣	中国科学院微生物研究所	29	240	9.0	14.0
2	朱宇	中国科学院微生物研究所	2	10	1.0	2.0
6	田宇清	中国科学院微生物研究所	7	26	3.0	5.0
7	冯迟	中国科学院微生物研究所	1	1	1.0	1.0