不同冻存液对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

• 作者: 张琪 李小毛 李田 许成芳 陈少宏
• 来源期刊: 器官移植
• 学科: 医学
• 关键词: 间充质干细胞 脐带 冻存液 复苏
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 268-273
• 页数: 6页
• 分类号: R617
• 字数: 3436字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2013.05.006

摘要

目的 观察不同冻存液对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUC-MSC)冻存复苏后生物学特性的影响,优化冻存方法.方法 脐带取自2011年1月至2011年12月在中山大学附属第三医院产科剖宫产的足月健康产妇.从脐带分离得到的hUC-MSC培养传代,取第3代细胞.根据冻存液不同分为3组,A组冻存液为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO):胎牛血清(fetal bovine serum,FBS):低糖杜氏培养基(low glucose Dulbecco's modified Eagle's medium,LG-DMEM)为1∶2∶7,B组为DMSO:FBS:LG-DMEM为1∶5∶4,C组为DMSO∶ FBS为1∶9,不含LG-DMEM.经冻存12个月,复苏细胞,以第3代未冻存细胞悬液作为对照组,采用台盼蓝染色法比较hUC-MSC的细胞存活率,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法比较细胞的生长情况绘制生长曲线,倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用流式细胞仪检测各组细胞的表面标记.结果 A、B、C三组的细胞存活率分别为(20±4)％、(71±8)％和(85±7)％.与C组比较,A组和B组的细胞存活率降低,差异有统计学意义(均为P ＜0.05).细胞生长曲线显示,与对照组相比,C组hUC-MSC在各时间点细胞生长迅速,但差异无统计学意义(P＞0.05);B组hUC-MSC在24 h、48 h、72 h细胞生长差异无统计学意义(P＞0.05),在96 h时间点生长速率低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);而A组hUC-MSC在各个时间点细胞生长减慢,差异有统计学意义(均为P＜0.05).形态学观察显示,A组细胞胞体宽大多角,并且较多分支,B组和C组细胞饱满,折光性好,呈长梭形、纺锤形或多角形.A组细胞复苏后细胞数目过少无法进行表面标记,B组和C组hUC-MSC表面标记物CD31、CD34、CD45、人类白细胞抗原(HLA)-DR表达阴性,CD105、CD90、CD44表达阳性.结论 含高浓度血清的冻存液适合hUC-MSC的长期保存,含90％ FBS的冻存液为hUC-MSC的最佳冻存保护液.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李小毛	中山大学附属第三医院妇产科	322	2116	21.0	31.0
2	张琪	中山大学附属第三医院肝移植中心	49	172	7.0	9.0
3	许成芳	中山大学附属第三医院妇产科	56	364	10.0	16.0
4	李田	中山大学附属第三医院妇产科	64	405	11.0	16.0
5	陈少宏	中山大学附属第三医院肝移植中心	10	12	2.0	2.0