诱导人脐带MSCs分化为胰岛样细胞团的促成熟方案及机制

• 作者: 王圳 王跃春 苏仲春 陈家劲 陈志明
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脐带 间充质干细胞 激素原转化酶 胰岛样细胞团
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 294-301
• 页数: 8页
• 分类号: R329
• 字数: 5489字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.02.019

摘要

目的:通过各种生物化学制剂的不同组合在体外诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向胰岛样细胞团(ILCs)分化,筛选出能表达激素原转化酶(PC)1和PC2的促成熟方案.方法:用胶原酶Ⅱ消化、过滤离心和不完全消化传代的方法从人的完整脐带中分离和纯化hUC-MSCs,流式细胞术、RT-PCR和免疫细胞荧光技术检测其干细胞标志物.选用A、B、C 3种方案诱导hUC-MSCs向ILCs分化:方案A为含10 μg/L 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、10 μg/L 表皮生长因子(EGF)、10 mg/L银杏提取液(GBE)及2%胎牛血清(FCS)的高糖培养基IMDM;在方案A基础上加入10 μg/L尼克酰胺为方案B;在方案B基础上加入10 μg/L肝细胞生长因子(HGF)为方案C.在hUC-MSCs诱导前后,通过倒置显微镜观察其形态变化,采用RT-PCR、qPCR和Western blotting检测胰岛相关mRNA和蛋白,特别是PC1和 PC2的表达情况.结果:(1)细胞形态、表面相关抗原、干细胞特异基因的表达等情况表明hUC-MSCs可以从人脐带中被成功地分离和纯化;hUC-MSCs普遍表达nestin,轻微表达Isl1.(2) RT-PCR检测发现方案A诱导的ILCs有Glut-2和MafA mRNA表达,方案B诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1和PC2 mRNA表达,方案C诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1和胰岛素mRNA表达,提示A、B和C 3种方案诱导的细胞有逐渐成熟的趋势.qPCR检测也证实了PC1 mRNA仅在方案C中有表达,PC2 mRNA在方案B和方案C中均有表达,但方案C中PC2 mRNA的表达量显著高于方案B(P<0.01);Western blotting结果也表明PC1蛋白只在方案C中有表达;PC2酶原(ProPC2)与PC2在方案B和方案C中都有表达,且它们在方案C中的表达量均显著高于方案B(P<0.01).结论:(1)hUC-MSCs具有向胰岛祖细胞或胰岛细胞分化的潜能;(2)方案C中尼克酰胺和HGF可促进hUC-MSCs向ILCs分化,使ILCs表达PC1并上调PC2;相对于方案A和B,方案C是一种促成熟方案.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王跃春	暨南大学医学院生理学系	55	393	10.0	18.0
2	苏仲春	暨南大学医学院生理学系	3	8	2.0	2.0
3	陈志明	暨南大学医学院生理学系	4	21	3.0	4.0
4	陈家劲	暨南大学医学院生理学系	3	24	3.0	3.0
5	王圳	暨南大学医学院生理学系	3	8	2.0	2.0