p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究

• 作者: 伊力亚尔·夏合丁 刘涛 刘清 卢晓梅 林仁勇 郑树涛 高向朋 鲁芒
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 食管鳞癌 p38α RNA干扰 过表达
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 757-761
• 页数: 5页
• 字数: 3789字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2013.08.017

摘要

目的 探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在食管鳞癌细胞Eca109中的可能作用.方法 构建p38α特异性的shRNA干扰载体,瞬时转染Eca109细胞,运用qRT-PCR、免疫印迹分别检测p38α干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果；运用MTT和流式细胞仪检测p38α干扰后Eca109细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变.作为平行反向验证,转染含有p38α全长cDNA的真核过表达质粒,运用免疫印迹检测p38α过表达后在蛋白水平上的表达效果；运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38α的变化后细胞迁移能力的改变.结果 p38α基因在受干扰后,测定其蛋白水平表达水平(22.970±2.857)较空质粒组(35.658 ±2.286)降低,差异具有统计学意义(t=-4.475,P＜0.01).观察Eca109细胞的增殖变化,发现干扰48 h后吸光度值(0.951±0.086)大于对照组细胞(0.811 ±0.012)(t=3.20,P＜0.05),表明Eca109细胞增殖加快.观察细胞周期和凋亡变化发现,干扰48 h后凋亡率(17.400±5.495)较空质粒组(1.000 ±0.721)增加(t=40.06,P＜0.01)；干扰72 h后细胞迁移速度(0.034±0.031)较空质粒组(0.278±0.021)加快(t=-5.79,P＜0.01),表明浸润能力增加.p38α在过表达后,检测到其内源性p38α蛋白表达水平(41.170±2.357)高于对照组(35.658±2.286)(t=4.41,P=0.005)；48 h过表达组吸光值(0.472±0.089)与对照组细胞吸光值(0.811±0.012)相比,细胞增殖受到抑制(t=-7.50,P＜0.01),细胞生长活动在G1期受阻(t=4.80,P＜0.01),并且其细胞凋亡(32.233±1.457)高于空质粒组(1.000±0.721)(t=17.20,P＜0.01),细胞迁移[(0.770±0.054) mm]较空质粒组[(0.278±0.021) mm]减慢并且浸润受到抑制(t=11.00,P＜0.01).结论 p38dMARK抑制食管鳞癌细胞Eca109的发生发展过程.