人主动脉瓣间质细胞原代培养及体外钙化模型的建立

• 作者: 刘晓红 张伯尧 张米 张锡武 徐志云 陆方林 韩林 龚德军
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 主动脉瓣 间质细胞 细胞培养技术 细胞表型
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 488-492
• 分类号: R329.29
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2013.00488

摘要

目的 原代培养人主动脉瓣间质细胞并建立体外瓣膜细胞钙化模型,诱导人主动脉瓣间质细胞向成骨细胞分化,并观察其表型变化.方法 采用胶原酶两次消化法原代培养人主动脉瓣间质细胞,取传代3～7代间质细胞,随机分为2组,实验组以钙化诱导培养基培养,对照组以标准培养基培养.1周后,行von Kossa染色观察钙化结节形成情况,分光光度计测定碱性磷酸酶活性,免疫荧光染色检测瓣膜间质细胞表型蛋白,real-time PCR及蛋白质印迹分析检测成骨相关因子的表达,评价模型建立情况.结果 培养1周后实验组出现钙化结节,每孔钙化结节数量[(51.20±14.31)个]高于对照组[(3.60±1.82)个],差异有统计学意义(P＜0.05),同时实验组碱性磷酸酶活性较对照组升高(约上升4倍,P＜0.05),细胞收缩表型平滑肌肌动蛋白(α-SMA)增高.Real-time PCR及蛋白质印迹分析提示,实验组中成骨相关因子Runx2、osteocalcin及osteopontin在mRNA及蛋白水平均较对照组升高,磷酸化Smad1/5/8蛋白表达也同时升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立了人主动脉瓣间质细胞体外诱导钙化模型,诱导后间质细胞呈现相对激活状态,表型向收缩表型和成骨表型转化,为今后实验提供了可靠的细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆方林	第二军医大学长海医院胸心外科	78	278	8.0	11.0
2	徐志云	第二军医大学长海医院胸心外科	360	1416	15.0	20.0
3	刘晓红	第二军医大学长海医院胸心外科	67	510	10.0	20.0
4	韩林	第二军医大学长海医院胸心外科	116	507	11.0	14.0
5	龚德军	第二军医大学长海医院胸心外科	48	127	6.0	7.0
6	张锡武	第二军医大学长海医院胸心外科	11	26	3.0	3.0
7	张伯尧	第二军医大学长海医院胸心外科	4	9	2.0	3.0
8	张米	第二军医大学长海医院胸心外科	2	6	2.0	2.0