胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管体外共培养体系的建立

• 作者: 宋先敏 李晓雨 汤维芳 郑宏良 陈世彩 陈东辉 高颖娜
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 运动神经元 成肌细胞 肌收缩 共同培养技术 神经肌肉接头
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1277-1280
• 分类号: R329.29
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2013.01277

摘要

目的 获得胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管共培养的条件,在体外建立稳定的神经-肌肉共培养体系,并形成功能性的神经肌肉接头.方法 C2C12成肌细胞株体外扩增培养至60％～70％融合时,用分化培养液诱导分化;取孕15～16 d的SD大鼠,提取胚胎大鼠脊髓前角运动神经元细胞,种植到分化5d的C2C12肌管细胞中,在神经元基础无血清培养液Neurobasal+2％B27中共培养.倒置显微镜下观察各个阶段神经元形态及突起长度的变化、肌管形态变化及收缩特性、神经肌肉接头的形成,应用免疫荧光染色技术检测突触后膜乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)特异性结合物α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BTX),并采用屏幕录像技术记录共培养体系中肌肉收缩现象.结果 在共培养体系中,原代脊髓运动神经元与C2C12肌管细胞均能存活并进一步分化成熟.3d时,可见运动神经元伸出的轴突延伸至肌管膜表面或包绕肌管;1周时,肌管按同一方向排列,出现广泛的节律性收缩,同时免疫荧光染色结果显示α-BTX特异性结合突触后膜AChR;共培养10d后,运动神经元开始凋亡,肌管细胞逐渐出现萎缩现象.结论 在体外培养条件下,无需特殊培养基和各种营养因子,运动神经元和骨骼肌细胞即可共同生存、生长并进一步发育,建立突触连接,触发一系列神经肌肉接头信号转导,引发肌管节律性收缩.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑宏良	第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科	133	504	11.0	14.0
2	陈世彩	第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科	40	128	6.0	7.0
3	陈东辉	第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科	27	95	5.0	8.0
4	李晓雨	第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科	5	7	2.0	2.0
5	高颖娜	第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科	4	4	2.0	2.0
6	汤维芳	第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科	3	0	0.0	0.0
7	宋先敏	第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科	3	0	0.0	0.0