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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CHIPS基因的克隆、序列分析及原核表达
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CHIPS基因的克隆、序列分析及原核表达
作者:
关小珊
关锐梨
周珍文
容莉莉
杨镒宇
谢永强
邓秋连
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
MRSA
CHIPS
克隆
原核表达
摘要:
目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)趋化抑制蛋白(CHIPS)进行扩增、克隆、序列分析、原核表达及纯化,为后续的疫苗研究奠定基础.方法 根据GenBank中趋化抑制蛋白(CHIPS)的序列,设计一对特异性引物,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增CHIPS基因,纯化DNA进行EcoRI、XhoI双酶切鉴定及测序鉴定,并将CHIPS亚克隆入表达载体PET-28α,转化感受态大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导表达重组蛋白,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证重组蛋白的表达.结果 以金黄色葡萄球菌临床儿童分离株基因组为模板,成功扩增CHIPS基因,基因大小为450bp;重组PET-28a(+)-CHIPS双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示CHIPS在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.98%.经IPTG诱导后,pET-28a(+)-CHIPS/BL21在相应分子量(17kDa)可见融合蛋白在上清表达,免疫印迹检测到目的蛋白.结论 成功从儿童分离株MRSA中构建了CHIPS的原核表达系统,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为后续的疫苗研究奠定基础.
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文献信息
篇名
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CHIPS基因的克隆、序列分析及原核表达
来源期刊
广州医药
学科
关键词
MRSA
CHIPS
克隆
原核表达
年,卷(期)
2013,(4)
所属期刊栏目
临床诊疗
研究方向
页码范围
1-4
页数
4页
分类号
字数
2813字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1000-8535.2013.04.002
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
杨镒宇
广州医学院附属广州市妇女儿童医疗中心
4
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邓秋连
广州医学院附属广州市妇女儿童医疗中心
3
17
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3
谢永强
广州医学院附属广州市妇女儿童医疗中心
4
28
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4
关小珊
广州医学院附属广州市妇女儿童医疗中心
2
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周珍文
广州医学院附属广州市妇女儿童医疗中心
4
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关锐梨
广州医学院附属广州市妇女儿童医疗中心
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容莉莉
广州医学院附属广州市妇女儿童医疗中心
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研究主题发展历程
节点文献
MRSA
CHIPS
克隆
原核表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
广州医药
主办单位:
广州市第一人民医院
出版周期:
双月刊
ISSN:
1000-8535
CN:
44-1199/R
开本:
大16开
出版地:
广州市盘福路1号广州市第一人民医院
邮发代号:
46-34
创刊时间:
1970
语种:
chi
出版文献量(篇)
5805
总下载数(次)
4
总被引数(次)
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