葡萄卷叶伴随病毒2号p24蛋白基因转化烟草的研究

• 作者: 李捷 程玉琴
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 葡萄 异源表达 RNA干扰 RNA沉默抑制子
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 生物质研究
• 页码范围: 138-142
• 分类号: S663.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11841/j.issn.1007-4333.2013.06.19

摘要

以含有葡萄卷叶伴随病毒2号(Grapevine leafroll-associated virus 2,GLRaV-2)p24蛋白基因的T载体(p-G2-p24)为模板,PCR扩增该蛋白基因的全长序列及其5′端长300 bp的正反向片段.将p24蛋白基因全长序列定向克隆到表达载体pCsuper 1300+上,得到重组质粒pCsuper1300-p24.将正反向片段先后插入具内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint-p24-F-R.然后用HindⅢ和Sac Ⅰ双酶切pBSint-p24-F-R,将切下的带内含子的正反向串联片段定向克隆到植物表达载体pCsuper 1300+上,得到含有发夹结构的RNAi重组质粒pCsuper-p24 F-R.将pSuper1300-p24和pCsuper-p24-F-R分别通过农杆菌浸润叶盘法转化本生烟.经过RT-PCR和PCR检测,分别获得了异源表达p24的T0和T1代阳性株系各34和12个,转化pCsuper-p24-F-R的T0和T1代阳性株系各17和7个.该结果可为p24功能研究及培育RNAi介导的抗病毒葡萄新种质提供试验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程玉琴	中国农业大学农学与生物技术学院	13	139	7.0	11.0
2	李捷	中国农业大学农学与生物技术学院	5	12	3.0	3.0