葡萄卷叶伴随病毒3号抗血清的制备及应用

• 作者: 吕睦頔 李捷 王克双 程玉琴 费菲
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 化学
• 关键词: 葡萄融合蛋白 ACP-ELISA Western blot 分离物
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 页码范围: 81-85
• 分类号: O629.73
• 语种: 中文

摘要

为获得特异性抗血清用于批量检测葡萄苗木中的葡萄卷叶伴随病毒3号（Grapevine leafroll associatedvirus 3,GLRaV-3）,本研究用含有GLRaV-3CP蛋白基因的载体pMD18-CP为模板,PCR扩增CP蛋白基因。将PCR产物定向克隆到原核表达载体pET-28a（＋）上,转化大肠杆菌BL21（DE3）,筛选得到阳性克隆pET-G3CP。用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,GLRaV-3CP在大肠杆菌中得到高效表达。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。经分析,抗血清效价为1/214,试验结果显示,此抗血清能用于葡萄植株样品中GLRaV-3不同分离物检测。