日本血吸虫脱尾童虫表膜结合短肽的筛选与鉴定

• 作者: 刘彦 张组萍 曾庆仁 王可耕 蔡立汀 顾孔珍
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 表膜 噬菌体展示技术
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 27-32
• 分类号: R383.24
• 语种: 中文

摘要

目的 筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫(Schistosomajaponicum)脱尾童虫表膜特异性结合而不与尾蚴表膜结合的短肽并鉴定. 方法 利用M13噬菌体十二肽库,经体外逆向差异筛选日本血吸虫尾蚴和脱尾活童虫,从第3轮回收的结合噬菌体中随机挑取15个克隆进行测序.获取目标噬菌体后,采用ELISA法、洗脱回收率实验(以M13KE为阴性对照)和免疫组织化学法检测日本血吸虫脱尾童虫、尾蚴与噬菌斑克隆的特异性结合.荧光显微镜观察人工合成的阳性噬菌体短肽与日本血吸虫脱尾童虫体外的特异性结合.构建目的片段pEGFP-C2质粒体外转染日本血吸虫脱尾童虫. 结果 经3轮逆向差异筛选后,噬菌体回收率从第1轮的3.50×105％到第3轮的3.20×10-2％,富集度明显提高.DNA测序结果表明,15个噬菌体克隆分别含有ZL6、ZL4和ZL1等3个不同的短肽序列.ELISA结果显示,M13噬菌体短肽ZL4 (MppZL4)、MppZL6和MppZL1分别与脱尾童虫膜蛋白结合后的P/N值为6.72,3.65和2.22,分别与尾蚴膜蛋白结合后的P/N值为1.58,5.15和1.20.洗脱同收率实验结果显示,MppZL4与脱尾童虫洗脱回收率[(4.60±0.27)×10-2％]远高于MppZL6 [(2.10±0.23) ×10-3％]、MppZL1[(1.20±0.28) ×10-3％]和M13KE[(1.30±0.60)×10-7％) (P＜0.01).免疫组化结果显示,日本血吸虫脱尾童虫与MppZL4特异性结合,阳性率为83.0％ (83/100).荧光显微镜检测结果显示,人工合成的RhB-ZL4可与日本血吸虫脱尾童虫体外特异性结合.构建的ZL4/pEGFP-C2质粒体外可成功转染日本血吸虫脱尾童虫. 结论 筛选获得的短肽ZL4能与日本血吸虫童虫表膜特异性结合,不与尾蚴表膜结合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾庆仁	中南大学基础医学院细胞与分子生物学实验中心	58	252	9.0	12.0
2	刘彦	南华大学医学院寄生虫学教研室	40	104	5.0	6.0
3	顾孔珍	中南大学基础医学院细胞与分子生物学实验中心	20	78	4.0	8.0
4	王可耕	南华大学医学院寄生虫学教研室	24	209	7.0	14.0
5	张组萍	中南大学基础医学院细胞与分子生物学实验中心	3	15	3.0	3.0
6	蔡立汀	中南大学基础医学院细胞与分子生物学实验中心	1	3	1.0	1.0