mTOR抑制剂FIM-A对人骨肉瘤细胞株MG-63的抑制作用及其机制

• 作者: 刘蔚楠 吴朝阳 张俐 林建华 林金銮 程元荣 罗鸿斌 蓝文彬 黄捷
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: mTOR抑制剂 FIM-A 骨肉瘤 MG-63细胞 mTOR
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 419-424
• 分类号: R738.1|R979.1|R730.54
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.04.007

摘要

目的:观察新型哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalia target of rapamycin,mTOR)抑制剂含磷西罗莫司衍生物FIMA对入骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响.方法:不同浓度(1x10-9 ～1 x10-5 mol/L) FIM-A处理MG-63细胞后,采用CCK-8法检测MG-63细胞的增殖,流式细胞术检测MG-63细胞周期和凋亡情况,ELISA法检测血管内皮细胞生长因子(vaseular endothelial cell growth factor,VEGF)和低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1 α,HIF-1)的分泌量,RT-PCR和Western blotring分别检测FIM-A对MG-63细胞中mTOR、p70核糖体S6激酶(p70S6 kinase protein,p70s6k)及4E结合蛋白1(4E-binding protein 1,4E-BP1)mRNA和蛋白表达的影响.结果:与人成骨hF-OB1.19细胞相比,人骨肉瘤MG-63细胞中mTOR、p70s6k及4E-BP1 mRNA的表达水平明显升高(P＜0.05).FIM-A可有效抑制MG-63细胞的增殖(P＜0.05),且呈剂量依赖性(r=0.940,P＜0.01).1×10-6 mol/L FIM-A处理24h后与对照组相比,G0/G1期MG-63细胞比例明显增加[(56.4±3.2)％vs (43.4±6.9)％,P＜0.05],而MG-63细胞的凋亡率没有明显改变.不同浓度FIM-A作用24h后,MG-63细胞中HIF-1α和VEGF表达均明显低于对照组(P＜0.05),且具有剂量依赖性(HIF-1α,r=-0.988,P＜0.01；VEGF,r=-0.998,P＜0.01).同时,FIM-A对MG-63细胞中mTOR(r=-0.919,P＜0.01)、p70s6k(r=-0.843,P＜0.01)及4EBP1(r=-0.818,P＜0.01)蛋白的磷酸化也具有浓度依赖性抑制作用.结论:FIM-A能抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,并阻滞细胞周期于G0/G1期,其机制可能与影响mTOR信号通路蛋白磷酸化有关.