玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化

• 作者: 孙鹤 朱莉 郎志宏 黄大昉
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 玉米 小麦 水稻 原生质体
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 224-234
• 语种: 中文

摘要

玉米Zea mays L.、小麦Triticum aestivum L.、水稻Oryza sativaL.是三大重要粮食作物,对其原生质体制备条件的优化具有重要意义.以玉米(综3)、小麦(中国春)、水稻(日本晴)10日龄幼苗为材料,研究了叶肉细胞原生质体分离过程中的酶浓度、酶解时间和离心力大小等因素对产量和活力的影响.结果表明:酶浓度和酶解时间对原生质体产量影响显著,随着酶解液浓度和酶解时间的提高,原生质体产量增加,但细胞碎片同时增多.水稻经真空处理后,原生质体产量大幅度提高.通过正交实验设计得出如下结果:玉米叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为:纤维素酶1.5％,离析酶0.5％,50 r/min酶解7h,100×g离心2 min收集,原生质体产量为7×106/g FW；小麦叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为:纤维素酶1.5％,离析酶0.5％,50 r/min酶解5h,100×g离心2 min收集,原生质体产量为6×106/g FW;水稻叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为:纤维素酶2.0％,离析酶0.7％,50 r/min酶解7h,1 000×g离心2 min收集,得到的原生质体产量为6×106/g FW.通过二乙酸荧光素染色发现原生质体活力均在90％以上.用PEG-Ca2+介导法将含有绿色荧光蛋白的质粒转化入原生质体,转化率可达50％ ～80％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄大昉	中国农业科学院生物技术研究所	96	1673	22.0	38.0
2	郎志宏	中国农业科学院生物技术研究所	37	472	14.0	21.0
3	朱莉	中国农业科学院生物技术研究所	25	286	8.0	16.0
4	孙鹤	中国农业科学院生物技术研究所	6	190	4.0	6.0