拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件优化

• 作者: 付岗 叶云峰 吴礼和 张晋 杜婵娟 杨迪 潘连富 王维
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 哈茨木霉 gz-2菌株 原生质体 绿色荧光蛋白 标记技术
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 植物保护·农业气象
• 页码范围: 1817-1823
• 页数: 7页
• 分类号: S476
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2017.10.14

摘要

[目的]优化拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件,快速、高效获得绿色荧光标记菌株,为哈茨木霉及同类真菌的GFP标记提供参考,并为下一步研究其在不同环境中的定殖动态、分布规律及生防特性等打下基础.[方法]采用PEG-CaCl2介导的原生质体转化体系,从木霉菌株的菌龄、酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B(HmB)的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件进行优化,获得表达稳定的转化子,并与出发菌株的生长特性进行比较,评价转化效果.[结果]gz-2菌株培养36 h菌丝所形成的原生质体稳定性最好,菌丝体酶解3.5 h获得的原生质体数量最多,达11.67×106个/mL;每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL,得到的转化子数量最多,为8.67个/皿;再生培养基中HmB含量为600μg/mL时可获得稳定的强转化子.[结论]筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株,该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异,且具有较好的遗传稳定性.