1,5-二咖啡酰奎宁酸减轻MPP+所致PC12细胞损伤的机制研究

• 作者: 刘人恺 曹旭 李建英 李雯飞 杨志刚 杨春水 林勤郁 肖海兵
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 1,5-二咖啡酰奎宁酸 核因子2红系相关因子2 氧化应激 Erk激酶 帕金森病
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 262-267
• 页数: 6页
• 分类号: R742.5
• 字数: 4924字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2013.03.004

摘要

目的 探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)是否通过激活Nrf2而减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)所致的PC12细胞损伤,并对可能的信号通路进行研究.方法 采用MPP+处理具有多巴胺(DA)能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病(PD)的体外模型.实验分为正常对照组、MPP+处理组、1,5-diCQA预处理+MPP+处理组,为了观察1,5-diCQA预处理的浓度-效应关系,将1,5-diCQA的浓度设为10、20、50、100 μmol/L.用CCK8法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞谷胱甘肽(GSH)水平和活性氧族(ROS)水平,Western blot 检测各组细胞的Nrf2蛋白水平.进一步采用siRNA转染沉默Nrf2,加入MAPK家族一系列激酶抑制剂后再检测上述相关指标.结果 MPP+ (250 mmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,GSH耗竭,ROS生成增多,说明PD细胞模型建立成功.不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量效关系;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以明显上调Nrf2蛋白的水平.沉默Nrf2后,1,5-diCQA预处理对MPP+诱导损伤的PC12细胞的保护作用消失,细胞存活率未能回升[MPP+组vs.MPP++1,5-diCQA组:(19.47 ± 1.65)% vs.(21.13 ± 2.85)%,P=0.352 6],GSH水平在Nrf2敲除的PC12细胞中明显下降[NT siRNA组vs.Nrf2 siRNA组:(15.05 ± 1.71)nmol/mg protein vs.(4.31 ± 0.83) nmol/mg protein,P＜0.001],且1,5-diCQA预处理对GSH耗竭的逆转效应也消失.对MAPK激酶家族的一系列激酶进行信号通路筛选发现,Erk激酶参与了1,5-diCQA通过激活Nrf2而减轻MPP+诱导的PC12细胞损伤这一过程.结论 1,5-diCQA可浓度依赖性地减轻MPP+诱导的PC12氧化应激损伤.这种保护作用是通过激活Erk激酶,进而激活Nrf2,然后上调细胞内源性抗氧化系统来实现的.