利用重叠延伸PCR快速构建中国株乙型肝炎病毒的感染性克隆

• 作者: 孙伟 张娜 朱丹丹 杨帆 段义农 陆仁飞 鲍静
• 来源期刊: 南通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 C基因型 感染性克隆 复制 表达
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 461-466
• 页数: 6页
• 分类号: R373.2|Q785
• 字数: 4859字
• 语种: 中文

摘要

目的：体外扩增中国株乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)的基因组全长序列，快速构建中国株HBV感染性克隆，建立中国株HBV体外复制细胞模型。方法：设计保守引物，扩增HBV全长基因组序列。对扩增到的HBV基因组进行DNA测序及计算机辅助分析，确定病毒的基因型。通过重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR，SOE-PCR)技术，构建1.3倍基因组长度的HBV感染性克隆质粒pHBV1.3。将pHBV1.3质粒转染人肝癌细胞系HepG2，采用Western Blot、酶联免疫吸附试验及Real-PCR检测病毒复制及表达情况。检测该感染性克隆对临床抗病毒药物阿德福韦的敏感性。结果：成功扩增到1株C基因型HBV全长基因组，其GenBank登陆号为KF495606。构建了中国株HBV感染性克隆pHBV1.3(C)质粒，该质粒能在肝癌细胞株中进行有效的复制、转录和表达。阿德福韦能在体外抑制该HBV感染性克隆的复制，抑制程度依赖于药物浓度。结论：利用SOE-PCR可快速构建HBV感染性克隆，所构建的感染性克隆能介导高水平病毒复制，可用于HBV复制机制和抗病毒等方面的研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张娜	南通大学公共卫生学院	18	140	6.0	11.0
2	段义农	南通大学医学院病原生物学系	44	104	6.0	7.0
3	朱丹丹	南通大学医学院病原生物学系	26	68	5.0	6.0
4	陆仁飞	南通市第三人民医院检验科	13	18	3.0	3.0
5	孙伟	南通大学医学院病原生物学系	13	21	3.0	4.0
6	鲍静	南通大学医学院病原生物学系	2	3	1.0	1.0
7	杨帆	南通大学公共卫生学院	13	43	5.0	6.0