两种鮰爱德华菌 ELISA 快速检测方法的建立与应用

• 作者: 叶仕根 张显昱 李华 李强 李明 黄华
• 来源期刊: 中国农业科技导报
• 学科: 农学
• 关键词: 鮰爱德华菌 检测 间接ELISA 竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 175-182
• 页数: 8页
• 分类号: S917.1
• 字数: 5855字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0864.2013.03.25

摘要

为了对水产动物致病菌鮰爱德华菌进行早期、快速地检测,以鮰爱德华菌单克隆抗体5D11作为检测抗体,分别建立了间接 ELISA 和竞争 ELISA 两种快速检测鮰爱德华菌的方法,并用棋盘滴定法进行了条件的优化。结果显示,间接 ELISA 实验中采用37℃过夜这种包被方法能有效促进酶标板对细菌的吸附作用,单克隆抗体和二抗的最佳稀释倍数分别为1∶80和1∶1000,病原菌的检测灵敏度为5×106 cells/ mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,并且可用于对鮰爱德华菌标准菌株及其分离株的快速检测；同时采用棋盘滴定法确定了竞争 ELISA 实验中包被抗原-抗体最佳工作组合为5×108~1∶80、抗体和竞争抗原比例为3∶7,并制作出了相关系数为0.9901的标准曲线,该方法特异性强,最低检出限106 cells/ mL,可在一定范围内对鮰爱德华菌进行定性和定量检测,弥补了间接 ELISA 的不足。