美洲型与欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7蛋白的截短表达和鉴定

• 作者: 倪建强 刘奇 宁昆 汪葆玥 田克恭 翟新验 蔡林 遇秀玲 邱鹏
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp7蛋白 融合PCR 分型诊断
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 21-30
• 语种: 中文

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) Nsp7蛋白具有较强的免疫原性,且在美洲型(NA)和欧洲型(EU) PRRSV之间免疫原性差异显著,是抗体分型检测的理想靶抗原.本研究采用原核表达系统分别表达和纯化了NA和EU PRRSV Nsp7蛋白,Western blotting分析表明重组蛋白与相应血清型抗体有较强的免疫反应,但特异性较差,与另一血清型抗体仍存在一定的免疫反应,预示两种血清型PRRSV Nsp7蛋白存在免疫交叉反应抗原表位,全长表达不能用于分型诊断.利用生物学软件分析NA和EU PRRSV Nsp7的相似抗原表位,采用融合PCR缺失其编码序列后,经表达纯化获得NA-△Nsp7和EU-△Nsp7两种截短蛋白,蛋白大小约为43 kDa,Western blotting分析表明NA-△Nsp7和EU-△Nsp7可分别与相应血清型抗体发生特异性反应,且无免疫交叉反应,为NA和EU PRRSV分型抗体检测试剂的研制奠定了基础.