组织型纤溶酶原激活剂突变体瑞替普酶的原核表达、活性鉴定及酶动力学

• 作者: 占志 朱美财 李飞 蔡庆 马红雨
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 组织型纤溶酶原激活物 突变 基因表达 酶类 动力学
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 418-422
• 页数: 5页
• 分类号: Q55|R966
• 字数: 4240字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2013.03.019

摘要

目的 重组表达抗纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)作用的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体(PA1 t-PA),经诱导表达、复性和纯化后进行生物学活性和酶动力学分析.方法 构建pBV220-t-PA重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5α,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性.结果 经测序t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30％,经纯化后纯度＞95％,比活性为4.2×108 IU·g-1,t-PA突变体与PAI-1反应后其活性未受到抑制.t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.3298 μmol· L-1,最大水解速度Vmax为0.0476 μmol·min-1 ·g-1.结论 t-PA突变体能够明显抵抗PAI的抑制作用,并具有良好的生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李飞	河北北方学院研究生部	41	210	8.0	13.0
3	马红雨	中国人民解放军空军总医院临床检验中心	15	16	3.0	3.0
4	蔡庆	中国人民解放军空军总医院临床检验中心	11	109	6.0	10.0
7	朱美财	中国人民解放军空军总医院临床检验中心	7	7	2.0	2.0
8	占志	中国人民解放军空军总医院临床检验中心	3	5	1.0	2.0