重组纤溶酶原激活剂及其突变体的表达研究

• 作者: 张守峰 扈荣良 李敏 王玉炯 赵君
• 来源期刊: 宁夏大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组纤溶酶原激活剂 突变体 表达
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 研究专题
• 页码范围: 71-75
• 页数: 5页
• 分类号: Q71
• 字数: 3646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-2328.2002.01.018

摘要

利用PCR技术,获得了人体组织型纤溶酶原激活剂tPA cDNA的缺失突变体--rPA;在此基础上,运用定点突变技术,得到rPA的定点突变体--rPA(KHRR296～299AAAA),rPA(A473S)和二者的复合突变体rPA(KHRR296～299AAA/A473S);将rP及其3个突变体分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,获得表达载体pErA,pErA(K),pErA(A)和pErA(KA).酶切鉴定和序列分析结果均表明实现了实验设计的氨基酸突变.表达载体转化大肠杆菌,经IPTG诱导、菌体裂解及SDS-PAGE电泳分析发现,只缺失而无突变的pErA和突变的pErA(A)都未表达目的蛋白,突变体pErA(K)与pErA(KA)则获高水平表达;蛋白产量分别占菌体总蛋白的35.97%与37.71%,分子量均为39.6 kD.Western blotting显示,表达产物与抗tPA抗体呈特异性阳性反应.该产物经初步纯化后进行复性与活性(mFAPA)测定,结果表明其复性产物具有明显的体外纤溶活性.以上结果为rPA突变体的进一步纯化、体内活性研究以及规模化制备提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玉炯	宁夏大学生物工程系	108	671	13.0	20.0
2	李敏	宁夏大学生物工程系	48	200	7.0	12.0
3	赵君	军需大学军事兽医研究所	2	14	2.0	2.0
4	扈荣良	军需大学军事兽医研究所	2	16	2.0	2.0
5	张守峰	军需大学军事兽医研究所	1	10	1.0	1.0